Video: ¿Cuál es el propósito de la purificación del producto de PCR?
2024 Autor: Miles Stephen | [email protected]. Última modificación: 2023-12-15 23:35
Purificación de ADN de un PCR La reacción es típicamente necesaria para el uso posterior y facilita la eliminación de enzimas, nucleótidos, cebadores y componentes tampón. Tradicionalmente, esto se lograba utilizando métodos de extracción orgánicos, como la extracción con fenol cloroformo, seguida de precipitación con etanol.
También la pregunta es, ¿por qué es necesario purificar los productos de PCR?
Necesitas purificar productos de PCR para deshacerse de los cebadores, nucleótidos y enzimas no utilizados con el fin de optimizar el éxito de la ligadura, que mantendrá y secuenciará la producto de PCR . Para purificar los Productos de PCR , se utiliza cromatografía de exclusión por tamaño.
Además, ¿qué debo hacer después de la PCR? Para maximizar la recuperación, enjuague la copa de retenido dos veces con 10 a 20 µL de TE o agua. El final PCR La reacción puede contener hasta un microgramo de ADN amplificado que se puede utilizar para una variedad de aplicaciones de biología molecular. Estas aplicaciones pueden ser más o menos sensibles a los componentes residuales del PCR mezcla de reacción.
También se puede preguntar, ¿cómo se limpian los productos de PCR?
Los métodos clásicos utilizados para limpio hasta Productos de PCR antes de la secuenciación incluyen electroforesis en gel, precipitación con etanol y cromatografía en columna. Si bien son bastante efectivos, estos métodos pueden volverse engorrosos rápidamente cuando se procesan varias muestras en paralelo y presentan diversos grados de pérdida de muestra.
¿Por qué se debe limpiar el ADN?
Nosotros limpio hasta ADN de soluciones acuosas para eliminar sales tampón, enzimas u otras sustancias que puedan afectar las aplicaciones posteriores. Los ejemplos incluyen reacción de PCR limpio hasta, limpio después de resúmenes de restricción y limpio de genómico o plásmido ADN contaminado con proteínas / desechos celulares.
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